（特别声明：以下细胞均为科研用途细胞 ，仅供科研学术用途，非临床和工业用途。）

通派细胞库细胞检测平台提供细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期、细胞迁移等细胞学检测技术服务。

通派细胞库提供平板克隆形成和软琼脂克隆形成实验服务，可检测各种贴壁细胞和非锚着依赖生长的细胞，如骨髓造成干细胞、肿 瘤细胞株等。提供完整实验报告，实验原始数据、图片。

3T3-L1细胞株：小鼠脂肪细胞/组织来源：脂肪/ 生长特性：贴壁/ 3T3-L1细胞培养条件：DMEM-H +10%CS

Daudi细胞株： 人Burkkit淋巴 瘤细胞 /组织来源： 淋巴/ 生长特性： 悬浮/ Daudi细胞培养条件： 1640+10%FBS

(HEC-1B细胞系)人子宫内膜腺癌细胞HEC-1-B细胞[HEC-1B细胞、HEC1B细胞]

(GIK细胞系)草鱼肾细胞GIK细胞

(HL细胞系)人胚肺二倍体细胞HL细胞

NCI-H157细胞实验/人非小细胞肺腺 癌细胞NCI-H157细胞

C8-B4小鼠脑 神经细胞 C8-B4细胞

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L5178Y细胞株：小鼠淋巴 瘤细胞/ 组织来源：淋巴/ 生长特性：悬浮/ L5178Y细胞培养条件：1640+10%FBS

NIH/3T3细胞株：小鼠胚胎细胞 /组织来源：胚胎/ 生长特性：贴壁/ NIH/3T3细胞培养条件：DMEM-H +10%CS

M-07e细胞实验/人巨核细胞白血 病细胞株M-07e细胞(H4细胞系)人神经胶质 瘤细胞H4细胞

药物MTT法实验步骤:

贴壁细胞：

1: 收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度 1000-10000 孔，(边缘孔用无菌PBS填充)。

2: 5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底(96孔平底板),加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前天下午铺板，次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个，否则难以反应真实情况

3: 5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。

4: 每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ml，即0.5%MTT)，继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。

5: 终止培养，小心吸去孔内培养液。

6: 每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。

7: 同时设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜)。

C8-B4小鼠脑 神经细胞 C8-B4细胞

细胞培养注意事项：

1）荧光染色法观察：用荧光染料Hoechst33258，此染料能与 DNA 特异地结合，可使支原体内的 DNA 着色，然后用荧光显微镜观察。

(12430-062高糖DMEM，液体)(11960-044高糖DMEM，液体)

2）染色方法为：用支持物盖片培养法将细胞接种在盖片上，在细胞汇合前（即未长满前）取出玻片，于碟皿中，用不含酚红的Hanks 液漂洗，1:3醋酸钾固定10分钟。

(12430-047高糖DMEM，液体)(12430-104高糖DMEM，液体)

3）再用生理盐水漂洗后置于50μg/mL的Hoechst33258(生理盐水配制)中染色10分钟，置于蒸馏水漂洗1～2分钟，向细胞面滴加数滴pH5.5磷酸缓冲液，然后置荧光显微镜下观察。

(21063-029高糖DMEM，液体)(21063-045高糖DMEM，液体)

4）若用细胞培养液，先离心去除上清液，再加入Hanks液漂洗，离心弃上清后加入1:3 醋酸甲醇固定10分钟,用生理盐水漂洗后去上清液.

(12491-015高糖DMEM，液体)(12491-023高糖DMEM，液体)

5）用Hoechst33258 染色10分钟，加入蒸馏水漂洗，离心去上清蒸馏水，加3～5滴pH5.5磷酸缓冲液，稍吹打使沉淀细胞重悬浮，用吸管吸出，滴于载物片上，盖上盖片后观察。

6）荧光显微镜下支原体呈绿色小点，散在于细胞周围或附于细胞表面。