HuCCT1细胞 人胆管上皮癌细胞

细胞：HuCCT1细胞

中文名称：人胆管上皮癌细胞 

生长特性：贴壁细胞

培养基：DMEM-H +10%FBS

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

细胞常规培养传代流程（ 请严格遵照无菌操作）

1． 吸出原培养瓶中的培养基，PBS 缓冲液润洗细胞两次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在 1-2min）

2． 镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰_酶，加 6~8ml 培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散。

3． 取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4． 注意培养基 PH 值变化情况，定期换液（每周 2-3 次），待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

完_全的人类单倍体细胞系——每个细胞均只包含23条染色体的单个副本。为了生成这些细胞，研究人员借助了称作为CRISPR/Cas9的基因编辑技术。

（人SGC-7901细胞 来源：通派细胞库 人胃腺癌细胞）

由于缺少第二基因拷贝大大简化了基因失活，人类近单倍体细胞系成为了遗传筛查和基因组工程的重要工具。然而，一直以来缺乏人类完_全单倍体细胞系，阻碍了对某些基因的遗传操控。

（人HSF细胞 来源：通派细胞库 人皮肤成纤维细胞 ）

除15号染色体的一个30兆碱基(megabase)的杂合片段外，人类近单倍体细胞系HAP1包含了所有染色体的单个副本。这一大的片段具有330个基因，被整合到了19号染色体的长臂上。

（小鼠P815细胞 来源：通派细胞库 小鼠肥大细胞瘤细胞）

我们的手边拥有了这种近单倍体细胞系，但它包含的这一15号染色体大片段让我们感到非常困扰。这一片段达到了最小染色体的一半大小，因此是一个相当大的dna片段。

（人HSC细胞 人肝星状细胞 来源：通派细胞库）

希望能够除去这一添加在19号染色体中的DNA大片段，使得检测15号染色体上的基因功能变得更加的容易。利用二倍体细胞开展研究，如果你在一个拷贝的基因中导入突变，它的效应可以被另一个拷贝所掩盖；

（HSG细胞 下颌下腺细胞 来源：通派细胞库）

为了除去这一跨越330个基因，近3000万个碱基对的遗传物质，研究人员转而借助了CRISPR/Cas9技术。设计出了一些引物，使得Cas9内切核酸酶靶向这一多余片段的任一末端；

（HSY细胞 腮腺上皮细胞 来源：通派细胞库）

随后筛查了生成的细胞系——大约400个不同的克隆，找到了正确删除这一片段的细胞系。两个克隆符合期望的最终产物：生成了没有额外的15号染色体部分的完_全单倍体细胞系。

（人A2780细胞 人卵巢癌细胞 来源：通派细胞库）

对于那些试图阐明基因突变对于人类细胞影响的遗传学家们来说，这些单倍体细胞将很有用处。它还提供了第一个例子将CRISPR/Cas9系统用于这样大的DNA片段。