HSkMC细胞 人骨骼肌细胞

细胞：HSkMC细胞

中文名称：人骨骼肌细胞

生长特性：贴壁细胞

培养基：MEM+10%FBS

冻存条件：50%基础培养基、40% FBS、10% DMSO

细胞常规培养传代流程（ 请严格遵照无菌操作）

1． 吸出原培养瓶中的培养基，PBS 缓冲液润洗细胞两次，加 2-3 ml 0.25% 胰_酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在 1-2min）

2． 镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰_酶，加 6~8ml 培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散。

3． 取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。

4． 注意培养基 PH 值变化情况，定期换液（每周 2-3 次），待细胞密度达到 80%以后重复 1 项操作或冻存。

（网络信息主针对网络推广作用，仅供参考，细胞培养请咨询细胞库管理员，以细胞库管理员提供给您的信息为准，操作前，如果有不明白之处，先咨询细胞库管理员，避免不必要的损失；）

RNAi在哺乳动物细胞中通常用于阻断特定基因的表达从而研究基因的功能，常见的做法是将靶向特定基因的大约21碱基长短的双链sirnas(small interfering RNAs)，或者是45—50-mer的发夹结构RNA（small hairpin RNA, shRNA）转染到细胞。

（人DU4475细胞 乳上皮细胞）（人EB-3细胞 伯基特淋巴瘤细胞）

shRNA在细胞内会自动被加工成为siRNA，从而引发基因沉默或者表达抑制。现在有多个报道说通过质粒表达siRNAs同样可以抑制特定基因的表达。

（人H1HeLa细胞 宫颈细胞）（人HS 683细胞 脑胶质瘤细胞）

尽管细节各有不同，但载体大都是用PolIII启动子启动编码shRNA(small hairpin RNA)的序列。选用PolIII启动子的原因在于这个启动子总是在离启动子一个固定距离的位置开始转录合成RNA，遇到4—5个连续的U即终止，非常精确。

（人J82细胞 膀胱癌细胞）（人Jurkat细胞 白血病细胞）

当这种带有PolIII 启动子和shRNA编码序列的质粒转染哺乳动物细胞时，这种能表达siRNA的质粒确实能够下调特定基因的表达，抑制范围包括外源基因和内源基因。

（人JurkatE6-1细胞 白血病细胞）（人MDA-MB-175Ⅶ细胞 乳导管癌细胞）

采用这种方法的优点在于，通过siRNA表达质粒的选择标记，siRNA载体能够更长时间地抑制目的基因表达。